目录

前言 I

第 1 章 饲料中斑蝥黄含量的测定 1

1.1 仪器设备与试剂 1

1.2 实验方法 2

1.2.1 标准混合工作液配制 2

1.2.2 色谱条件 2

1.3 实验结果 3

1.3.1 典型分离色谱图 3

1.3.2 线性与检出限 3

第 2 章 动物源性食品中斑蝥黄的测定 4

2.1 仪器设备与试剂 4

2.2 实验方法 6

2.2.1 标准混合工作液配制 6

2.2.2 试剂配制 6

2.2.3 样品前处理 6

2.2.4 色谱条件 6

2.3 实验结果 7

2.3.1 典型分离色谱图 7

2.3.2 线性与检出限 8

2.3.3 实际样品分离色谱图 8

前言

2019 年 3・15 晚会曝光了多个鸡蛋品牌使用斑蝥黄饲养出的笼养鸡蛋冒充 “土鸡蛋” 高价销售，欺骗消费者，着实又引起一大片偏爱土鸡蛋消费者的惊恐之声。那么，这鸡蛋的化妆品 -- 斑蝥黄，到底是什么呢？

斑蝥黄是一种维生素 A 源类胡萝卜素，亦称角黄素。它天然存在于许多食物中，如蘑菇、鱼类和蛋类等。作为色素，可以从天然产品中提取，也可以通过人工进行合成。其作为饲料添加剂混合在动物饲料中使用，可以使食用的禽类、三文鱼等肉质颜色更加红润，蛋黄的颜色更加鲜明诱人。

从目前的研究来看，该色素安全性佳，合理使用，不会对人体健康产生不利影响。我国原农业部发布的《饲料添加剂品种目录 (2013)》中规定，斑蝥黄是可以作为着色剂在家禽饲料中添加使用的。在欧盟国家，斑蝥黄也是允许被作为着色剂，添加到鳟鱼饲料、鲑鱼饲料和家禽饲料中，且有明确的限量标准：蛋鸡饲料中 8 毫克 / 千克，其他家禽和鲑科动物饲料中 25 毫克 / 千克。

目前我国对斑蝥黄的使用、“土鸡蛋” 的规范等还未有明确标准，虽然 “化妆鸡蛋” 不会对百姓身体健康造成影响，但利用 “化妆鸡蛋” 欺骗消费者，却是违法行为。

依利特公司依据《NYT2896-2016 饲料中斑蝥黄的测定 高效液相色谱法》和《SN/T 2327-2009 进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法》分别对饲料中和鸡蛋中的斑蝥黄进行了检测，推出了斑蝥黄检测解决方案，与 3・15 一起，守护大家食品安全，保障消费者权益。

I

第 1 章 饲料中斑蝥黄含量的测定

此方法参考《NY/T 2896-2016 饲料中斑蝥黄的测定 高效液相色谱法》，本标准适用于预混合饲料添加剂、浓缩饲料及配合饲料中斑蝥黄的测定。

1.1 仪器设备与试剂

表 1-1 (a) EClassical 3100 型高效液相色谱系统设备标准配置清单

1.2 实验方法

1.2.1 标准混合工作液配制

标准品的工作液：取一定体积标准储备液，用流动相稀释并定容至所需浓度。

1.2.2 色谱条件

流动相：正己烷 / 丙酮 = 93/7 (V/V)

色谱柱：Supersil SiO2 4.6×250mm

流速：1.5mL/min

波长：466nm

进样量：20µL

温度：30℃

1.3 实验结果

1.3.1 典型分离色谱图

进样分析浓度为 5.0µg/mL 标准品工作液，使用上述色谱条件，结果如下图所示。

1.3.2 线性与检出限

配制浓度分别为 1µg/mL、2µg/mL、5µg/mL、25µg/mL、100µg/mL 的标准工作液，按浓度由低至高进样，以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，斑蝥黄线性相关性结果如下。

噪声按 0.04mV 计算，峰高为 3 倍信噪比对应的浓度为方法检出限，结果如下表所示。

第 2 章 动物源性食品中斑蝥黄的测定

此方法参考《SN/T 2327-2009 进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法》，本标准适用于黄鱼、鳗鱼、鸡肉、鸡蛋、鸭肝、猪肾和牛奶中角黄素、虾青素的测定。

2.1 仪器设备与试剂

实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶 (100mL、50mL、25mL、10mL)、移液枪 (0~1000µL，0~5000µL)、移液枪枪头 (1mL，5mL)、一次性 PVC 手套、一次性口罩、进样针、滤膜等若干。

2.2 实验方法

2.2.1 标准混合工作液配制

标准品的工作液：取一定体积标准储备液，用流动相稀释并定容至所需浓度。

2.2.2 试剂配制

乙腈提取液：0.25g BHT 溶解于 500mL 乙腈。

2.2.3 样品前处理

将生鸡蛋煮熟，用高速组织捣碎机充分捣碎、混匀。称取试样约 10g (精确至 0.01g) 于 50mL 离心管中，加入 30mL 乙腈提取剂及 10g 无水硫酸钠，涡旋混合 1min，在 35℃以下水浴超声提取 10min，再以 3000r/min 离心 5min。将上清液移入预置有 20mL 正己烷的 125mL 分液漏斗中，震摇 0.5min 后，静置分层；收集下层乙腈相，正己烷相留在分液漏斗，待本试样后续脱脂重复使用。

按上述步骤对离心管中的残留物每次用 20mL 乙腈提取剂再重复提取两次，所得提取液用上述正己烷相依次脱脂。合并三次脱脂后所收集的乙腈相，加入 5mL 正丙醇，于 40℃以下旋转蒸发浓缩近干，用乙腈溶解并定容至 2.5mL，过滤后滤液待用。

2.2.4 色谱条件

流动相：乙腈 / 水 = 95 / 5 (V / V)

色谱柱：Supersil ODS2 4.6×150mm

流速：1.0mL/min

波长：471nm

进样量：30µL

温度：35℃

2.3 实验结果

2.3.1 典型分离色谱图

进样分析浓度为 40µg/mL 准品工作液，使用上述色谱条件，结果如下图所示。

（图 2-1 标准品工作液谱图，横坐标为 Retention time (min)，范围 0-35，纵坐标为 Signal (mV)，范围 0-25，图中斑蝥黄对应峰的保留时间约为 19.45min）

2.3.2 线性与检出限

配制浓度分别为 4µg/mL、8µg/mL、40µg/mL、80µg/mL 的标准工作液，按浓度由低至高进样，以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性相关性结果如下。

噪声按 0.03V 计算，峰高为 3 倍信噪比对应的浓度为方法检出限，结果如下表所示。

2.3.3 实际样品分离色谱图

通过上述色谱数据及线性方程计算，某品牌鸡蛋中斑蝥黄含量为 2.4 mg/kg。

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上述内容为《斑蝥黄含量的测定 解决方案》核心文本内容原样呈现，完整 PDF 文档额外包含以下核心资源，可通过指定渠道获取：

高清资料：图 1-1（标准品工作液谱图）、图 2-1（标准品工作液谱图）、图 2-2（某品牌鸡蛋谱图）高清版（含保留时间标注、信号值刻度细节）、饲料及动物源性食品实际样品检测原始谱图；操作指南：样品前处理（超声提取、离心分离、旋转蒸发）操作视频、高效液相色谱仪（EClassical 3100 型、iChrom 5100 型）开机校准及参数设置教程、色谱柱（Supersil SiO₂、Supersil ODS2）安装与维护细则；拓展数据：不同类型饲料（预混合饲料添加剂、浓缩饲料、配合饲料）及动物源性食品（鸡肉、鸭肝、牛奶）斑蝥黄检测对比数据、方法精密度验证报告（RSD＜3%）、长期稳定性测试结果；附录文件：《NY/T 2896-2016 饲料中斑蝥黄的测定 高效液相色谱法》《SN/T 2327-2009 进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法》标准原文节选、仪器与试剂耗材订货清单（含色谱柱、溶剂过滤器、标准品型号编码）。

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