目录

第 1 章 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量测定 1

1.1 前言 1

1.2 仪器设备与试剂 2

1.3 实验方法 3

1.4 实验结果 4

第 2 章 蜂蜜中羟甲基糠醛含量测定 5

2.1 前言 5

2.2 仪器设备与试剂 5

2.3 实验方法 6

2.4 实验结果 7

第 3 章 蜂蜜中咖啡因含量测定 8

3.1 前言 8

3.2 仪器设备与试剂 9

3.3 实验方法 10

3.4 实验结果 10

第 4 章 蜂蜜中黄曲霉毒素含量测定 11

4.1 前言 11

4.2 仪器设备与试剂 13

4.3 实验方法 14

4.4 实验结果 15

4.5 小结 18

第 5 章 蜂蜜中四环素类抗生素含量测定 19

5.1 前言 19

5.2 仪器设备与试剂 19

5.3 实验方法 20

5.4 实验结果 22

第 6 章 蜂蜜中其它兽药测定 23

6.1 氯霉素 23

6.2 诺氟沙星 24

6.3 强力霉素 24

第 1 章 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量测定

1.1 前言

随着生活水平的提高，人们的保健意识也越来越强。蜂蜜是一种极好的食品和医疗保健品，是蜜蜂采集周边蜜源植物的花蜜并贮存在蜂巢中，与自身特殊物质结合，消化而成的天然甜味物质。蜂蜜主要由碳水化合物（约占总量的 3/4）和水分（约占总量的 1/4）组成，此外蜂蜜还含有转化酶、过氧化氢酶、淀粉酶、脂酶等蛋白质（酶）、有机酸、芳香物质、挥发油、蜡、色素及一些胶状物等。糖类物质尤其是单糖（葡萄糖和果糖）占碳水化合物的 85%-90%，形成了高糖分的饱和溶液。

随着蜂蜜销售的紧俏，一些不法商贩开始人为向蜂蜜中添加水、蔗糖、转化糖、饴糖、羧甲基纤维素、糊精或淀粉类物质以达到以次充好、提高产量的目的。但是假蜂蜜并不具天然蜂蜜的全部营养成分，更不具有天然蜂蜜独特的保健功能。

为满足对蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定，依利特公司结合 GB 5009.8-2016《食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》及《中国药典》2015 版第一部相关标准，采用示差折光检测器，经氨基色谱柱分离，根据保留时间定性和峰面积定量，提出了蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量测定的全套 HPLC 解决方案，包括前处理设备、试剂、前处理方法直至液相色谱方法。相关人员可参考本实验中的方法，进行蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的检测。

1.2 仪器设备与试剂

实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶 (100mL、50mL、25mL、10mL)、样品瓶 (1.5mL)、移液枪 (0~1000µL，0~5000µL)、移液枪枪头 (1mL，5mL)、一次性 PVC 手套、一次性口罩、进样针、滤膜等若干。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液配制

标准曲线的制备：准确称 2.5g 果糖、2.0g 葡萄糖标准品（精确至 0.0001g），加适量 40% 乙腈溶液溶解，并定容至 50mL，过滤，作为储备液；准确称 1.0g 蔗糖、1.0g 麦芽糖标准品（精确至 0.0001g），加适量 40% 乙腈溶液溶解，并定容至 50mL，过滤，作为储备液。

按照表 1-4 分别将四种单糖的储备液配成所需混标浓度（标准曲线浓度）：

1.3.2 样品前处理

取 2.5g 蜂蜜样品（精确至 0.0001g），加适量 40% 乙腈溶液溶解，并定容至 50mL，过滤，待测。

1.3.3 色谱条件

• 流动相：乙腈 / 水 = 75/25（V/V）
• 色谱柱：Supersil NH₂-S 5µm 4.6×250mm
• 流速：1.0mL/min
• 检测：RID（示差折光检测器）
• 进样体积：20µL
• 柱温：35℃

1.4 实验结果

图 1-1 标准品与样品典型分离色谱图

（谱图含果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖特征峰，标注 “单糖标准品”“椴树蜂蜜样品”，横坐标为保留时间 min）

第 2 章 蜂蜜中羟甲基糠醛含量测定

2.1 前言

蜂蜜中羟甲基糠醛（HMF）含量的多少是决定蜂蜜质量优劣的重要标准，国际贸易中 HMF 属于强检指标。HMF 不是蜂蜜中原来就含有的成分，而是后天产生的，当存放时间过长或者加工温度过高时自然产生。HMF 是黑色、具有难闻气味的有毒物质，它的存在导致蜂蜜风味和颜色改变，影响口感和外观；且 HMF 对眼、粘膜或皮肤有刺激性，食之过多会引起中毒。因此蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定非常重要。

图 2-1 羟甲基糠醛结构式（化学结构表达式略）

为满足对蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定，依利特公司结合 GB 18932.18-2003《蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法》及《中国药典》2015 版第一部相关标准，采用高效液相色谱 - 紫外检测法，经反相色谱柱分离，根据保留时间定性和峰面积定量，提出了蜂蜜中羟甲基糠醛含量测定的全套 HPLC 解决方案。相关人员可参考本实验中的方法，进行蜂蜜中羟甲基糠醛含量的检测。

2.2 仪器设备与试剂

2.3 实验方法

2.3.1 标准溶液配制

• 标准储备溶液：准确称取适量羟甲基糠醛标准物质于 100mL 容量瓶中，加约 10mL 甲醇溶解，用水稀释至刻度，配成 0.20mg/mL 的标准储备液。
• 标准工作溶液：分别吸取适量标准储备液至 100mL 容量瓶中，用 10% 甲醇溶液稀释至刻度，配成 0.10μg/mL、0.20μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、10μg/mL 的标准工作溶液，当天新鲜配制。

2.3.2 样品前处理

称取 10g 试样（精确至 0.01g），置于 100mL 烧杯中，加入 10mL 甲醇，用玻璃棒轻轻搅拌均匀，使试样完全溶解；转移至 100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，充分混匀，过滤，待测。

2.3.3 色谱条件

• 流动相：甲醇 / 水 = 10/90（V/V）
• 色谱柱：Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm
• 流速：1.0mL/min
• 检测波长：285nm
• 进样体积：10µL
• 柱温：30℃

2.4 实验结果

完整方案（PDF 版）下载提示

上述内容为《蜂产品 HPLC 检测 解决方案》全文原样呈现，完整 PDF 文档额外包含以下核心资源，点击链接即可获取：

高清资料：所有章节谱图（图 1-1 至图 6-3）高清版（含峰形放大细节、基线噪声标注）、实际蜂蜜样品（椴树蜜、市售蜂蜜）检测原始谱图；

操作指南：免疫亲和柱净化 / 固相萃取操作视频、光化学衍生器安装与维护教程、样品前处理（高速搅拌、氮吹浓缩）实操演示；

拓展数据：各检测项目（糖类、HMF、咖啡因等）的加标回收率报告（85%-106%）、方法精密度验证数据（RSD＜2%）、不同蜂蜜基质（椴树蜜、洋槐蜜）检测对比表；

附录文件：GB 5009.8-2016、GB 5009.22-2016 等标准原文节选、仪器操作安全规范、耗材订货清单（色谱柱、试剂、滤膜型号编码）。

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