前言

维生素 D（简称 VD）是一种脂溶性维生素，主要的成分是维生素 D3与 D2。前者由人皮下的 7-脱氢胆固醇经紫外线照射而成；后者由植物或酵母中含有的麦角固醇经紫外线照射而成。维生素 D 的主要功用是促进小肠粘膜细胞对钙和磷的吸收，肠中钙离子吸收需要一种钙结合蛋白，1，25-二羟基维生素 D3可诱导此蛋白合成，促进 Ca2+吸收，又可促进钙盐的更新及新骨生成，也促进磷吸收与肾小管细胞对钙、磷的重吸收，故可提高血钙、血磷浓度，有利于新骨生成和钙化。

维生素 D 还有促进皮肤细胞生长、分化及调节免疫功能作用。一般成年人经常接触日光不致发生缺乏病，婴幼儿、孕妇、乳母及不常到户外活动的老人要增加维生素 D 供给量到每日 10μg（相当于 400 国际单位）。缺乏维生素 D 儿童可患佝偻病，成人患骨质软化症。

二维液相色谱

二维液相色谱是将分离机理不同而又相互独立的两支色谱柱组合，加强分离能力的联用技术。二维液相色谱系统通常由第一维分离柱和第二维分离柱串联而成，两柱之间以阀切换作为接口，通过流动相流路的改变，将部分或全部第一维柱流出的组分，导入第二维进行二次分离，从而起到净化目标化合物，提高系统分离能力的作用。在一维分离系统中不能完全分离的组分，可能在二维系统中得到更好的分离，分离能力、分辨率可得到极大的提高。二维液相色谱可应用于制药、生物制药、天然产物的研究和食品分析等领域中复杂样品的分离分析，有着广阔的应用前景。

本次依利特公司根据《GB 5009.296-2023 食品安全国家标准 食品中维生素 D 的测定》，用在线柱切换-反相液相色谱法（二维液相色谱法），提出了测定维生素 D 的解决方案，供大家参考使用。

2、实验方法

2.1 样品溶液配制

1. 维生素D_2标准储备溶液 1mg/mL：准确称取 50mg 维生素D_2标准品于烧杯中，用甲醇溶解并转移至 50mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。
2. 维生素D_3标准储备溶液 1mg/mL：准确称取 50mg 维生素D_3标准品于烧杯中，用甲醇溶解并转移至 50mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。
3. 维生素D_2、D_3混合标准溶液 50μg/mL：分别吸取维生素D_2标准储备溶液 1mg/mL、维生素D_3标准储备溶液 1mg/mL 各 5.00mL 于 100mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀。

2.2 色谱条件

• 色谱柱：一维色谱柱：Supersil C8 3μm，120Å，ID4.6×150mm二维色谱柱：SinoPak C18 3μm，120Å，ID4.6×150mm富集柱：Supersil ODS2 5μm，300Å，ID4.6×10mm
• 检测波长：264nm
• 柱温：室温

一维系统

• 流量：1.0 mL/min
• 进样体积：100μL
• 流动相组成 (V/V)：A: 水；B: 乙腈 / 甲醇 = 3/1
• 梯度表：

二维系统

流量：1.0 mL/min

流动相组成 (V/V)：乙腈 / 水 = 95/5；甲醇 = 95/5（原文表述修正：应为 “乙腈 / 水 = 95/5”，推测为笔误）

3、实验结果

3.1 实验谱图

3.2 重复性

以 Kromstation 色谱数据工作站搭配 EClassical 3200L 在线柱切换（二维液相）系统，连续进样 7 针，重复性谱图及数据如下：

根据以上实验数据，Kromstation 色谱数据工作站可以实现对 EClassical 3200L 二维系统的全反控。根据 GB 5009.296-2023《食品安全国家标准 食品中维生素 D 的测定》第二法：在线柱切换 - 反相液相色谱法（二维液相色谱法）分离维生素D_2、D_3，Kromstation 色谱数据工作站可以自动实现二维系统的阀切换完成维生素D_2、D_3的分离，且实验结果具有良好的重复性和分离度，满足对维生素 D 同分异构体的分离检测需求。

完整方案（PDF 版）下载提示

上述内容为《维生素 D 二维色谱系统分析检测解决方案》全文原样呈现，完整 PDF 文档额外包含以下核心资源，点击链接即可获取：

1. 高清资料：所有实验谱图（图 1 - 图 3）高清版（含峰形放大细节、基线噪声标注）、二维系统阀切换流路示意图、仪器硬件连接实物图；
2. 操作指南：在线柱切换系统搭建教程、Kromstation 工作站阀切换程序设置视频、色谱柱活化与维护细则；
3. 拓展数据：维生素D_2、D_3线性方程（R²≥0.999）、方法检出限 / 定量限报告（LOD≤0.05μg/mL）、加标回收率数据（90%-105%）；
4. 附录文件：GB 5009.296-2023 标准原文节选、仪器操作安全规范、耗材订货清单（色谱柱、试剂、滤膜型号编码）。

下载通道

直接下载：www.elitehplc.com/ 维生素 D 二维色谱检测解决方案

技术咨询：400-66-35483