目录

第 1 章 前言 1

1.1 HPLC 法测定维生素含量的标准 1

1.2 仪器配置简表 2

第 2 章 维生素 A 的含量测定 3

2.1 反相高效液相色谱法 3

2.2 正相高效液相色谱法 10

2.3 紫外分光光度计法 11

第 3 章 维生素 D 的含量测定 13

3.1 反相高效液相色谱法 13

3.2 正相高效液相色谱法 19

第 4 章 维生素 E 的含量测定 21

4.1 反相高效液相色谱法 21

4.2 正相高效液相色谱法 26

第 5 章 维生素 B1 的测定 29

5.1 仪器设备与试剂 29

5.2 实验方法 30

5.3 实验结果 31

第 6 章 维生素 B2 的测定 34

6.1 仪器设备与试剂 34

6.2 实验方法 35

6.3 实验结果 36

第 7 章 维生素 B3 (烟酸) 的测定 39

7.1 仪器设备与试剂 39

7.2 实验方法 40

7.3 实验结果 41

第 8 章 泛酸的测定 44

8.1 仪器设备与试剂 44

8.2 实验方法 45

8.3 实验结果 46

第 9 章 维生素 B6 测定 49

9.1 仪器设备与试剂 49

9.2 实验方法 50

9.3 实验结果 51

第 10 章 维生素 K1 的测定 54

10.1 仪器设备与试剂 54

10.2 实验方法 55

第 11 章 叶酸的测定 56

11.1 仪器设备与试剂 56

11.2 实验方法 56

第 12 章 维生素 B12 的测定 57

12.1 仪器设备与试剂 57

12.2 实验方法 57

附录 1 维生素标准溶液校正方法 59

第 1 章 前言

维生素（英语：Vitamin）是一系列有机化合物的统称。它们是生物体所需要的微量营养成分，而一般又无法由生物体自己生产，需要通过饮食等手段获得。维生素不能像糖类、蛋白质及脂肪那样可以产生能量、组成细胞，但是它们对生物体的新陈代谢起调节作用。

维生素是食品中重要的营养成分，缺乏维生素会导致严重的健康问题，适量摄取维生素可以保持身体健康，过量摄取维生素却会导致中毒；因此食品中维生素含量的检测至关重要。国家颁布多项标准法规，对食品、保健品、食品添加剂等中维生素含量检测进行规范，以保障食品安全。依利特仪器参考国家标准及文献，整理了食品中维生素检测解决方案，供相关企业参考使用。

1.1 HPLC 法测定维生素含量的标准

第 2 章 维生素 A 的含量测定

2.1 反相高效液相色谱法

本节反相高效液相色谱法对维生素 A 进行检测是参考 GB 5009.82-2016《食品安全国家标准 食品中维生素 A、D、E 的测定》，适用于需要参照 GB 5009.82-2016 对食品中维生素 A 进行检测的用户参考使用。

2.1.1 仪器设备与试剂

实验过程中其它玻璃器皿还包括棕色容量瓶 (10mL、50mL)、1.5mL 塑料离心管、移液枪 (0~1000µL，0~5000µL)、移液枪枪头 (1mL，5mL)、一次性注射器 (1mL)、针筒式滤膜 (0.45µm)、进样针、一次性 PVC 手套、一次性口罩等。

2.1.2 实验方法

标准溶液配制

维生素 A 标准储备溶液 (0.500mg/mL)：准确称取 25.0mg 维生素 A 标准品，用无水乙醇溶解后，转移入 50mL 容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为 0.500mg/mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在 - 20℃下避光保存，有效期 1 个月。临用前将溶液回温至 20℃，并进行浓度校正。

维生素 A 标准溶液中间液：准确吸取维生素 A 标准储备溶液 1.00mL 和维生素 E 标准储备溶液各 5.00mL 于同一 50mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此溶液中维生素 A 浓度为 10.0μg/mL，维生素 E 各生育酚浓度为 100μg/mL。在 - 20℃下避光保存，有效期半个月。

维生素 A 标准系列工作溶液：分别准确吸取维生素 A 标准溶液中间液 0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL 于 10mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该标准系列中维生素 A 浓度为 0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、4.00μg/mL、6.00μg/mL，临用前配制。

样品前处理

试样制备：将一定数量的样品按要求经过缩分、粉碎均质后，储存于样品瓶中，避光冷藏，尽快测定。

注意：样品前处理使用的所有器皿不得含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不得涂油；处理过程应避免紫外光照，尽可能避光操作；提取过程应在通风柜中操作。

皂化

不含淀粉样品：称取 2g~5g（精确至 0.01g）经均质处理的固体试样或 50g（精确至 0.01g）液体试样于 150mL 平底烧瓶中，固体试样需加入约 20mL 温水，混匀，再加入 1.0g 抗坏血酸和 0.1g BHT，混匀，加入 30mL 无水乙醇，加入 10mL~20mL 氢氧化钾溶液，边加边振摇，混匀后于 80℃恒温水浴震荡皂化 30min，皂化后立即用冷水冷却至室温。

注：皂化时间一般 30min，如皂化液冷却后液面有浮油，需要加入适量氢氧化钾溶液，并适当延长皂化时间。

含淀粉样品：称取 2g~5g（精确至 0.01g）经均质处理的固体试样或 50g（精确至 0.01g）液体样品于 150mL 平底烧瓶中，固体试样需用约 20mL 温水混匀，加入 0.5g~1g 淀粉酶，放入 60℃水浴避光恒温振荡 30min 后，取出，向酶解液中加入 1.0g 抗坏血酸和 0.1g BHT，混匀，加入 30mL 无水乙醇，10mL~20mL 氢氧化钾溶液，边加边振摇，混匀后于 80℃恒温水浴振荡皂化 30min，皂化后立即用冷水冷却至室温。

提取：将皂化液用 30mL 水转入 250mL 的分液漏斗中，加入 50mL 石油醚 - 乙醚混合液，振荡萃取 5min，将下层溶液转移至另一个 250mL 的分液漏斗中，加入 50mL 的混合醚液再次萃取，合并醚层。

注：如只测维生素 A 与 α- 生育酚，可用石油醚作提取剂。

洗涤：用约 100mL 水洗涤醚层，约需重复 3 次，直至将醚层洗至中性（可用 pH 试纸检测下层溶液 pH 值），去除下层水相。

浓缩：将洗涤后的醚层经无水硫酸钠（约 3g）滤入 250mL 旋转蒸发瓶或氮气浓缩管中，用约 15mL 石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠 2 次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发仪或气体浓缩仪上，于 40℃水浴中减压蒸馏或气流浓缩，待瓶中醚液剩下约 2mL 时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹至近干。用甲醇分次将蒸发瓶中残留物溶解并转移至 10mL 容量瓶中，定容至刻度。溶液过 0.45μm 有机系滤膜后供高效液相色谱测定。

2.1.3 色谱条件

流动相：甲醇/水

色谱柱：Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm

或 Supersil PFP 5µm 4.6×250mm

或 Supersil C30 3µm 4.6×250mm

流量：1.0mL/min

检测：UV325nm

或激发 328nm，发射 440nm

进样体积：10μL

2.1.4 实验结果

Supersil PFP 5µm 4.6×250mm 色谱柱分析结果

根据浓度和峰面积数据，得到维生素 A 的线性曲线方程为：y=42.544x - 1.4395，R^{2}=1.000。因此维生素 A 在 0.2~10μg/mL 浓度范围内，线性关系良好。

重复性：用浓度为 10μg/mL 维生素 A 标准溶液，连续进样 6 针，峰面积和保留时间 RSD 结果如下：

该色谱条件下，仪器的基线噪音为 0.0302mAU，根据信噪比S/N=3，计算得到维生素 A 的仪器小检测浓度为 0.017μg/mL，实际方法检出限为 3.5μg/100g，比国标的方法检出限 10μg/100g，灵敏度高了不少。实际样品分析AD 钙奶样品中维生素 A 的含量分析

完整方案（PDF 版）下载提示

上述内容为《食品行业维生素检测 解决方案》前 10 页核心内容，完整 PDF 文档还包含以下关键信息，点击链接即可获取：

后续章节详情：第 2 章剩余内容（正相高效液相色谱法、紫外分光光度计法）及第 3 章至第 12 章（维生素 D、E、B 族、K1、叶酸、B12 等 11 类维生素的完整检测方法、实验结果及结论）；

高清资料：所有章节谱图（图 2-1 至图 12-1）高清版（含峰形放大细节、基线噪声标注）、实际食品样品（乳制品、保健品、谷物）检测原始谱图；

验证数据：各维生素线性方程、检出限 / 定量限报告、不同基质加标回收率数据（85%-103%）、精密度验证结果（RSD＜2%）；

操作指南：皂化 / 酶解操作视频、固相萃取实操教程、色谱柱活化与维护细则；

附录文件：GB 5009 系列、GB 14750 等标准原文节选、维生素标准溶液校正详细步骤、耗材订货清单（色谱柱、试剂、滤膜型号编码）。

下载通道

直接下载：www.elitehplc.com/ 食品维生素检测方案

技术咨询：400-66-35483