1 前言

培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有水、氮源、无机盐（包括微量元素）、碳源、生长因子（维生素、氨基酸、碱基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。其中培养基中氨基酸的检测受到广泛关注，本解决方案参考标准 “YY/T 1695-2020 人类辅助生殖技术用医疗器械培养用液中氨基酸检测方法” 中的氨基酸分析方法和标准 “GB5009.28-2016 食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定” 中的蛋白沉淀方法，给出了培养基样品预处理和 HPLC 在线分析测试方法。

依利特使用新推出的 EClassical 3200 液相色谱仪和经典的 Supersil AQ-C18 色谱柱，为培养基中氨基酸检测提出了分析检测解决方案，供相关人员参考使用。

2 仪器设备与试剂

3 样品中的氨基酸含量检测

3.1 样品制备

3.1.1 样品蛋白沉淀

称 2 g 样品于 50 mL 容量瓶中，加入 25 mL 水，超声溶解后加入蛋白沉淀剂（亚铁氰化钾和乙酸锌溶液各 2 mL），混匀后用离心机 8000 r/min 离心 5 min，清液转移至 50 mL 容量瓶中。于残渣内加入 20 mL 水，混匀后超声 5 min，用离心机 8000 r/min 离心 5 min，清液转移至之前的 50 mL 容量瓶中，加水定容至刻度。

3.1.2 样品衍生

精密量取对照品溶液 50 μL，置于 5 mL 塑料离心管中，精密加入 0.4 mol/L 硼酸盐缓冲液（pH 10.2）250 μL，混匀，精密加邻苯二甲醛溶液 50 μL，混匀，放置 30 s，精密加入芴代甲氧基酰氯溶液 50 μL，混匀，放置 30 s，精密加稀释剂 400 μL。

3.2 标准品制备

市售 18 种氨基酸标准溶液，其衍生方式同样品衍生方法。

3.3 溶液配置

1. 流动相 A：称取十二水合磷酸氢二钠 4.5 g，十水合四硼酸钠 4.75 g，加水 1000 mL，用盐酸调 pH 至 8.2。
2. 流动相 B：取甲醇 450 mL，乙腈 450 mL，水 100 mL，混匀。
3. 0.4 mol/L 硼酸盐缓冲液（pH 10.2）：取硼酸 24.73 g，加水 800 mL 溶解，用 40% 氢氧化钠溶液调 pH 至 10.2，然后加水稀释至 1000 mL。
4. 邻苯二甲醛溶液：取邻苯二甲醛 80 mg，乙酰半胱氨酸 97 mg，加 0.4 mol/L 硼酸盐缓冲液（pH 10.2）7 mL，加乙腈 1 mL 溶解。
5. 芴代甲氧基酰氯溶液：取芴代甲氧基酰氯 40 mg，加乙腈 8 mL 溶解。
6. 稀释液：取流动相 A 100 mL，加磷酸 0.5 mL，混匀。
7. 0.1 mol/L 盐酸溶液：取盐酸 9 mL，加水适量使成 1000 mL，摇匀。
8. 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液：称取 4 g 氢氧化钠，加新沸过的冷水使成 1000 mL，摇匀。

3.4 色谱条件

流动相梯度

• 色谱柱：Supersil AQ-C18 5 µm 4.6×150 mm
• 检测波长：338 nm（0-31 min，一级氨基酸）；262 nm（31-40 min，二级氨基酸）
• 进样体积：40 μL
• 柱温：50 ℃

4 18 种氨基酸混标测试（实验）结果

18 种氨基酸分析谱图

5 结论

本实验参考标准 “YY/T 1695-2020 人类辅助生殖技术用医疗器械培养用液中氨基酸检测方法” 中的氨基酸分析方法和标准 “GB5009.28-2016 食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定” 中的蛋白沉淀方法，对培养基中氨基酸成分进行分析检测。测试结果数据符合标准要求，结果表明：该系统稳定性良好，定量结果准确。

完整方案（PDF 版）下载提示

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高清资料：18 种氨基酸混标分析高清谱图（含各氨基酸峰标注、保留时间详情）、实际培养基样品检测原始谱图；

操作指南：蛋白沉淀分步操作视频、柱前衍生反应实操演示、色谱柱活化与维护教程；

拓展数据：18 种氨基酸线性方程（R²≥0.999）、检出限 / 定量限报告、加标回收率数据（88%-95%）、精密度验证结果（RSD＜2%）；

附录文件：YY/T 1695-2020、GB5009.28-2016 标准原文节选、仪器操作安全规范、耗材订货清单（色谱柱、试剂、滤膜型号编码）。

下载通道

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